rhSCF在大肠埃希菌中的高效表达及纯化

干细胞因子（SCF）是一种重要的造血生长因子,它在自体造血干细胞动员、肿瘤放疗化疗的辅助治疗以及其它血液病的治疗上具有良好的应用前景。为了制备高纯度、活性的重组人SCF,将人工合成的SCF的cDNA序列,克隆入原核表达载体pET43．1a中,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,获得了高效表达菌株。SCF通过诱导表达形成包涵体,包涵体经洗涤、变性和初步纯化后,进行直接稀释复性,复性液经离子交换层析、分子筛层析等分离除去共价二聚体和异构体,获得纯度大于95％的重组人SCF样品,生物学比活性在7．0×10^5U／mg以上。结果表明：建立了有效的rhSCF制备工艺,且产物具有较高的纯度和生物学活性。     

白木香内生真菌抗肿瘤抗菌活性的筛选研究

白本香[Aquilariasinensis（Lour．）Gilg]是我国特有的珍稀濒危药用植物。对已分离得到的白木香内生真菌的发酵液提取物的抗肿瘤抗菌活性进行了筛选。结果表明,对肿瘤细胞SF-268增殖的抑制率在90％以上的菌株有6株,占总菌株数的31．6％。其中有16株对金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌活性,占总菌株教的84．2％,有9株表现较强的抑菌活性。另外有1株时白色念珠菌表现较强的抑菌活性;有2株对黑曲霉表现一定的抑菌活性。所有菌株对大肠埃希菌都没有表现明显的抑菌活性。     

利用益生菌发酵提高花生壳粉饲用价值的研究

目的提高花生壳粉饲用价值。方法采用多种益生菌进行半固体发酵。结果益生菌发酵的花生壳粉,其蛋白质含量提高6．3％,无氮浸出物含量提高3．7％,粗纤维含量降低12．5％;用发酵的花生壳粉替代15％全价饲料饲喂生长育肥猪,增重和料重比与完全饲喂全价饲料对照组比差异无显著性,并能降低腹泻发生率和减少粪臭。结论益生菌发酵的花生壳粉能部分替代全价饲料喂猪和有效防制猪腹泻。     

封闭群五指山小型猪主要脏器重量与体重的相关性分析

目的测定封闭群五指山小型猪主要脏器重量和脏器系数,对脏器重量与体重的相关性进行分析,并计算出相应的直线回归方程和多元回归方程。方法实验选用6-10月龄普通级封闭群五指山小型猪30头（其中♂16头、♀14头）,分别测定体重和7个主要脏器重量,计算脏器系数,通过SAS软件进行脏器系数的性别间比较和各脏器重与体重间的相关与回归分析。结果性别间比较,小型猪仅有心脏的脏器系数差异有显著性（P〈0.05）。除公猪的胃脏和母猪的肺脏外,所测脏器重量与体重间均有明显的正相关线性关系;多因素分析显示公猪的肝脏和肾脏,母猪的心脏、肝脏和肾脏对各自体重有影响。结论封闭群五指山小型猪主要脏器系数性别间差异较小,其体重与某些脏器重量存在一定的线性关系。     

Changes in fertilizer-induced direct N2O emissions from paddy fields during rice-growing season in China between 1950s and 1990s

Nitrogen fertilizer‐induced direct nitrous oxide (N₂O) emissions depend on water regimes in paddy fields, such as seasonal continuous flooding (F), flooding–midseason drainage–reflooding (F‐D‐F), and flooding–midseason drainage–reflooding–moist intermittent irrigation but without water logging (F‐D‐F‐M). In order to estimate the changes in direct N₂O emission from paddy fields during the rice‐growing season in Mainland of China between the 1950s and the 1990s, the country‐specific emission factors of N₂O‐N under different water regimes combined with rice production data were adopted in the present study. Census statistics on rice production showed that water management and nitrogen input regimes have changed in rice paddies since the 1950s. During the 1950s–1970s, about 20–25% of the rice paddy was continuously waterlogged, and 75–80% under the water regime of F‐D‐F. Since the 1980s, about 12–16%, 77%, and 7–12% of paddy fields were under the water regimes of F, F‐D‐F, and F‐D‐F‐M, respectively. Total nitrogen input during the rice‐growing season has increased from 87.5 kg N ha⁻¹ in the 1950s to 224.6 kg N ha⁻¹ in the 1990s. The emission factors of N₂O‐N were estimated to be 0.02%, 0.42%, and 0.73% for rice paddies under the F, F‐D‐F, and F‐D‐F‐M water regimes, respectively. Seasonal N₂O emissions have increased from 9.6 Gg N₂O‐N each year in the 1950s to 32.3 Gg N₂O‐N in the 1990s, which is accompanied by the increase in rice yield over the period 1950s–1990s. The uncertainties in N₂O estimate were estimated to be 59.8% in the 1950s and 37.5% in the 1990s. In the 1990s, N₂O emissions during the rice‐growing season accounted for 8–11% of the reported annual total of N₂O emissions from croplands in China, suggesting that paddy rice development could have contributed to mitigating agricultural N₂O emissions in the past decades. However, seasonal N₂O emissions would be increased, given that saving‐water irrigation and nitrogen inputs are increasingly adopted in rice paddies in China.     

K14和CMV启动子驱动裸鼠体内HPV16 E6/E7基因表达的差异

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒,具有严格的嗜人组织的特性．为探讨不同启动子驱动HPV E6/E7癌蛋白在裸鼠体内不同组织的表达效率,构建了带有角蛋白(K14)启动子和带有巨细胞病毒（CMV）启动子的E6/E7腺病毒载体（pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7）,pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-6/E7、以及作为对照的重组腺病毒空载体pAdtrack- K14和pAd-CMV同源重组后,分别在293细胞中包装,收集重组病毒Ad-K14-E6/E7 、Ad-CMV-E6/E7、Adtrack-K14和Ad-CMV,通过尾缘静脉注射到随机分组的裸鼠体内,并每d向裸鼠腹腔注射0.05 mg雌激素．采用RT-PCR和Western 免疫印迹检测不同实验组E6/E7 mRNA 和蛋白表达水平,免疫组化法检测P53和Bcl-2蛋白表达．结果显示,注射病毒Ad-K14-E6/E7（实验组1）裸鼠子宫体中E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白高表达,而其它组织中低表达;注射病毒Ad-CMV-E6/E7（实验组2）裸鼠各组织E6/E7　mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白均低表达．研究表明,在裸鼠体内角蛋白K14启动子可以调控E6/E7在子宫体中表达,CMV启动子未能诱导E6/E7在子宫体中表达．     

帕金森病相关蛋白质LRRK2在脑中的表达分布与定位分析

帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种最常见的神经退行性运动障碍,常染色体显性遗传PD可由LRRK2 (leucine-rich repeat kinase 2)基因突变引起.原核表达和纯化得到LRRK2多肽与GST的融合蛋白,免疫新西兰雄兔,得到了anti-LRRK2兔多克隆抗体. 抗体用途分析实验表明,自制的anti-LRRK2兔多克隆抗体可用于Western 印迹, 免疫组织化学,免疫细胞染色等实验.利用自制的抗体,Western 印迹证明,LRRK2在大鼠脑主要神经解剖学部位均有表达.免疫荧光双染色的结果表明,LRRK2定位于线粒体.本研究对了解LRRK2在PD中的分子生物学功能具有重要的意义.     

我国人工养麝研究进展及养麝效益问题

我国人工养麝已历经半个世纪,人工养麝研究取得了重要进展,但从整体上看,疾病控制、产香量及养麝的整体效益仍是有待深入研究的课题.为进一步推进我国人工养麝研究和养麝业的发展,现就一些主要的研究进展进行了综述,提出了麝场的经济效益公式,认为在现有的管理体制下,养麝规模越大,经济效益反而越低.鉴于我国养麝业的特殊性及其存在的具体问题,国家应该将养麝业作为一项公益性的事业予以特殊的政策和资金方面的扶持.同时,鼓励医药企业积极投身于养麝研究与麝场建设,以共同推进养麝业的持续健康发展,从而使人工养麝能够为我国麝资源的保护和传统中药的传承做出应有的贡献.     

小鼠gdnf基因在真核细胞NIH-3T3中的表达

为了得到超量表达胶质细胞源神经营养因子'(glial cell line-derived neuotrophic factor,GDNF)的NIH-3T3细胞株,用于制作精原干(spermatogonial stem cells,SSCs)培养的饲养层,通过RT-PCR方法成功地从幼年小鼠睾丸中克隆了gdnf矿基因,构建了真核表达载体pcDNA3.1-gdnf,并用其转染NIH-3T3细胞.对筛选出的阳性细胞克隆进行的免疫荧光染色、RT-PCR和Western blotting的结果表明,获得了超量表达gdnf基因的NIH-3T3细胞株,这为精原干细胞的培养奠定了基础.     

沙门菌鞭毛蛋白增强新城疫病毒融合蛋白在小鼠中的免疫原性

目的：分析沙门菌鞭毛蛋白对新城疫病毒（NDV）融合蛋白（F蛋白）免疫原性的增强作用。方法：提取鼠伤寒沙门菌SL7207株鞭毛蛋白,将鞭毛蛋白与F蛋白以皮下注射的方式联合免疫C3H/HeJ小鼠,间隔2周免疫,共免疫3次。分别在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血清,应用ELISA法测定小鼠血清抗体;在第3次免疫后2周取免疫小鼠脾脏细胞,检测IFN-γ和IL-4特异性分泌细胞。结果：鞭毛蛋白与F蛋白联合免疫能诱导产生特异性的免疫应答,血清抗体水平显著高于F蛋白单独免疫组;在脾脏细胞中,检测到较高水平的IFN-γ和IL-4分泌细胞,免疫应答以Th1型为主。结论：鞭毛蛋白与F蛋白的联合免疫,可显著增强F蛋白的免疫原性,显示出鞭毛蛋白良好的免疫佐剂效应。